摘要
分光光度計(jì)
內(nèi)容
吸光光度法
一:吸光光度法基于物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)的光波具有選擇性吸收的能力而建立起來(lái)的分析方法。(一) 光線:光線的波長(zhǎng): 200nm-400nm 紫外線*400-750nm可見(jiàn)光*>750nm 紅外線光具有波粒二相性,波長(zhǎng)不同,其能量不同。(二) 物質(zhì)的吸收光譜及顏色:1. 物質(zhì)的原子吸收光譜和原子發(fā)射光譜:原
一:吸光光度法
基于物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)的光波具有選擇性吸收的能力而建立起來(lái)的分析方法。
(一) 光線:
光線的波長(zhǎng): 200nm-400nm 紫外線*
400-750nm可見(jiàn)光*
>750nm 紅外線
光具有波粒二相性,波長(zhǎng)不同,其能量不同。
(二) 物質(zhì)的吸收光譜及顏色:
1. 物質(zhì)的原子吸收光譜和原子發(fā)射光譜:原子的最外層電子可以選擇性吸收特征波長(zhǎng)的電磁波成為
激發(fā)態(tài)而產(chǎn)生的光譜稱為原子吸收光譜。激發(fā)態(tài)原子恢復(fù)到基態(tài),則釋放出特征波長(zhǎng)的光子,形成原子發(fā)射光譜。不同的溶液其光譜不同,即不同溶液對(duì)不同波長(zhǎng)的光其吸收能力不同,對(duì)某一特定波長(zhǎng)的光存在吸收峰。
2. 可見(jiàn)光由赤橙黃綠青蘭紫等能量不同的光線組成,當(dāng)可見(jiàn)光穿過(guò)某一溶液時(shí),由于特定波長(zhǎng)的
光被吸收而使溶液呈現(xiàn)相應(yīng)的顏色。(如CuSO4由于吸收了可見(jiàn)光中的黃光(600nm)而成藍(lán)色)不同顏色的溶液對(duì)不同波長(zhǎng)的光其吸收能力不同。
(三) 光吸收的基本定律(Lambert-Beer 定律):
一束平行單色光(Io)通過(guò)有色的透明溶液時(shí),一部分的光可以透過(guò)溶液(It),另一部分被溶液吸收(Ia),還有一部分被器皿表面反射(Ir),則:
Io=It+Ia+Ir 。那么,該溶液透光率為: T = It / Io 。
1. Lambert 定律:設(shè)有一束平行單色光,通過(guò)液層厚度為b 的均勻透明溶液,則溶液對(duì)光的吸收能力:
A=Ig(Io/It)=Ig(1/T)=k2b
k2 為吸光系數(shù),為常數(shù)。與入射光波長(zhǎng)、溶液性質(zhì)、濃度和溫度有關(guān);A 為吸光度(又稱光密度
O.D 或消光度E),當(dāng)入射光波長(zhǎng)、吸光溶液的濃度和溫度一定時(shí),A 與b 成正比。
2. Beer 定律:設(shè)有一束平行單色光,通過(guò)濃度為c 的均勻透明溶液,則溶液對(duì)光的吸收能力:
A=Ig(Io/It)=Ig(1/T)=k4c
k2 為常數(shù)。由Beer 定律可知:當(dāng)入射光波長(zhǎng)、吸光溶液的厚度和溫度一定時(shí),A 與c 成正比。
3. Lambert-Beer 定律:綜合1.2.得: A=Kbc ,
即:當(dāng)入射光波長(zhǎng)、吸光溶液的性質(zhì)和溫度一定時(shí),A 與b、c 成正比。
(四) 吸光光度法的基本原理:
1、 不同物質(zhì),由于其分子結(jié)構(gòu)和原子組成不同,故對(duì)光的吸收光譜不同(如:CuSO4),在測(cè)定不同顏
色的物質(zhì)濃度時(shí)要用最大吸收的波長(zhǎng)的入射光,這樣測(cè)量的靈敏度最高。
2、 同一種物質(zhì),若濃度不同,則對(duì)同一波長(zhǎng)的入射光的吸收能力(吸光度)也不同,且成正比關(guān)系。
3、 應(yīng)此,利用特定波長(zhǎng)的單色光(通常用最大吸收波長(zhǎng)的入射光)照射不同濃度的某一溶液時(shí),所得的吸光度大小應(yīng)與溶液濃度呈線性關(guān)系,故可利用該線性關(guān)系通過(guò)計(jì)算或查標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)求得未知溶液的濃度。
(五) 吸光光度法特點(diǎn):
1. 靈敏度高:mg%級(jí)、甚至ug%級(jí)。
2. 準(zhǔn)確度高:誤差2-5%
3. 操作簡(jiǎn)便、快速,儀器設(shè)備不復(fù)雜,價(jià)格低廉,故應(yīng)用廣泛。
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