HPLC系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(SOP)

1. 目的：規(guī)范高效液相色譜儀的使用。規(guī)范色譜柱的使用。
2．范圍
適用于高效液相色譜儀的維護(hù)使用。
3．職責(zé)
儀器使用者對(duì)本規(guī)程的實(shí)施負(fù)責(zé)。
4．規(guī)程
4.1 系統(tǒng)組成：
本系統(tǒng)由LC-10ATvp溶劑輸送泵、Rheodyne 7725i手動(dòng)進(jìn)樣閥、SPD-10Avp紫外-可見(jiàn)檢測(cè)器、N2000色譜數(shù)據(jù)工作站、色譜柱和電腦等組成，另外還包括打印機(jī)、不間斷電源等輔助設(shè)備。
4.2 準(zhǔn)備
4.2.1 準(zhǔn)備所需的流動(dòng)相，用合適的0.45μm濾膜過(guò)濾，超聲脫氣20min。
4.2.2 根據(jù)待檢樣品的需要更換合適的色譜柱（注意方向）。
4.2.3 配制樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液，用合適的0.45μm濾膜過(guò)濾。
4.2.4 檢查儀器各部件的電源線、數(shù)據(jù)線和輸液管道是否連接正常。
4.3 開(kāi)機(jī)：
接通電源，依次開(kāi)啟不間斷電源、泵、檢測(cè)器，待泵和檢測(cè)器自檢結(jié)束后，打開(kāi)打印機(jī)、電腦顯示器、主機(jī)，最后打開(kāi)色譜工作站。
4.4 參數(shù)設(shè)定
4.4.1 波長(zhǎng)設(shè)定：在檢測(cè)器顯示初始屏幕時(shí)，按[func]鍵，用數(shù)字鍵輸入所需波長(zhǎng)值，按[Enter]鍵確認(rèn)。按[CE]鍵退出到初始屏幕。
4.4.2 流速設(shè)定：在泵顯示初始屏幕時(shí)，按[func]鍵，用數(shù)字鍵輸入所需的流速（柱在線時(shí)流速一般不超過(guò)1ml/min），按[Enter]鍵確認(rèn)。按[CE]鍵退出。
4.5 更換流動(dòng)相并排氣泡
4.5.1 將管路的吸濾器放入裝有準(zhǔn)備好的流動(dòng)相的儲(chǔ)液瓶中；
4.5.2 逆時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)A/B泵的排液閥90-180°，打開(kāi)排液閥；

4.6 平衡系統(tǒng)
4.6.1打開(kāi)“在線色譜工作站”軟件，輸入實(shí)驗(yàn)信息并設(shè)定各項(xiàng)方法參數(shù)后，按下“數(shù)據(jù)收集”頁(yè)的 [查看基線] 按鈕。
4.6.2. 按泵的[pump]鍵， pump指示燈亮。用檢驗(yàn)方法規(guī)定的流動(dòng)相沖洗系統(tǒng)。
4.6.3 檢查各管路連接處是否漏液，如漏液應(yīng)予以排除。
4.6.4 觀察泵控制屏幕上的壓力值，壓力波動(dòng)應(yīng)不超過(guò)0.5MPa。如超過(guò)則可初步判斷為柱前管路仍有氣泡，按4.5重復(fù)操作。
4.6.5 觀察基線變化。如果沖洗至基線漂移<0.01mV/min，噪聲為<0.001mV時(shí)，可認(rèn)為系統(tǒng)已達(dá)到平衡狀態(tài)，可以進(jìn)樣。
4.7 進(jìn)樣
4.7.1 進(jìn)樣前按檢測(cè)器[zero]鍵調(diào)零，按軟件中 [零點(diǎn)校正] 按鈕校正基線零點(diǎn)，再按一下 [查看基線] 按鈕使其彈起。
4.7.2 用試樣溶液清洗注射器，并排除氣泡后抽取適量。
4.8．色譜柱的使用
4.8.1 色譜柱選擇：根據(jù)擬定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)選擇C8、C18、SIL等類型，一般首選短柱（可節(jié)約時(shí)間及試劑），遇到不能分離情況可考慮長(zhǎng)柱。
4.8.2 色譜柱使用：對(duì)色譜柱說(shuō)明仔細(xì)閱讀；使用相同類型預(yù)柱；應(yīng)保證流動(dòng)相PH在色譜柱適應(yīng)范圍內(nèi)（ph 2-8）；保證柱壓在可接受范圍內(nèi)（小于18MKP）。
4.8.3色譜柱清洗：
反相柱（C8、C18）
流動(dòng)相含鹽（可將加酸、加三乙胺等情況并入），以乙腈－水（5：95）沖洗30倍柱體積以上（可視具體情況增加沖洗量）。然后以甲醇沖洗20倍柱體積以上。
流動(dòng)相不含鹽 以流動(dòng)相沖洗20倍柱體積以上，然后以甲醇沖洗20倍柱體積以上。
流動(dòng)相為添加離子試劑：以乙腈－水（5：95）沖洗50倍柱體積以上（可視具體情況增加沖洗量）。然后以甲醇沖洗30倍柱體積以上。使用離子試劑色譜柱一般為專用，不建議用作其他項(xiàng)目測(cè)定。
正相柱
流動(dòng)相含鹽 以不含鹽流動(dòng)相沖洗30倍柱體積以上，再以正己烷沖洗20倍柱體積以上。如流動(dòng)相極性與正己烷有較大差異，可在流動(dòng)相沖洗后，以異丙醇低速?zèng)_洗進(jìn)行過(guò)渡（注意以異丙醇為流動(dòng)相流速不得超過(guò)0.5ml/min）。
流動(dòng)相不含鹽 以流動(dòng)相沖洗20倍柱體積以上，再以正己烷沖洗20倍柱體積以上。如流動(dòng)相極性與正己烷有較大差異，可在流動(dòng)相沖洗后，以異丙醇低速?zèng)_洗進(jìn)行過(guò)渡（注意以異丙醇為流動(dòng)相流速不得超過(guò)0.5ml/min）。
4.8.4色譜柱保養(yǎng)
色譜柱不使用時(shí)，務(wù)必將兩端密封。
對(duì)色譜柱不得有劇烈的震動(dòng)或敲打等行為。
對(duì)于長(zhǎng)期未使用的色譜柱，定期對(duì)其封存溶劑進(jìn)行置換。